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又一应用场景！功能性蛋白的无细胞合成！
研究表明无细胞蛋白表达可以替代传统的细菌表达，产生疏水蛋白，引入NMR活性同位素，提高NMR分析的速度。HET-s(218-289)在无细胞表达混合物中无需变形和纯化直接组装成感染性纤维。通过在氨基酸的关键位置引入定制的13C和15N同位素或CF3和13CH2F标记，CF合成的淀粉样原纤维在亚毫克量下容易接受高分辨率MAS NMR。
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淀粉样蛋白是一种结构有序的蛋白质聚集体，因其在蛋白质错误折叠疾病中的关键作用而受到广泛关注。淀粉样蛋白纤维结构主要是依靠于固态核磁共振(NMR)的手段，但快速磁角旋转(MAS)和1H检测方法的出现大大扩展了解密淀粉样原纤维结构组织的方法。 天然状态下，MAS核磁共振方法受到限制，需要富集引入核磁共振活性同位素。由于淀粉样蛋白固有的疏水性和聚集成包涵体的倾向，许多淀粉样蛋白在细菌系统中的表达具有挑战性。无细胞(CF)蛋白表达可以替代传统的细菌表达，产生疏水蛋白，引入核磁共振活性同位素，提高核磁共振分析的速度。 本文介绍了CF合成的淀粉样原纤维用于MAS NMR。作者利用CF表达系统在关键位点引入MNR活性同位素/标记。证明了HET-s(218-289)在无细胞表达混合物中直接组装成感染性纤维，不需要变性和纯化程序。通过在氨基酸的关键位置引入定制的13C和15N同位素或CF3和13CH2F标记，证明了无细胞合成的淀粉样原纤维在亚毫克量下容易接受高分辨率MAS NMR。
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