珀罗汀无细胞表达膜蛋白再突破--BLI实测超高亲和力！

2025-09-12

膜蛋白难表达、难折叠、难检测？

珀罗汀无细胞表达携手Gator® BLI检测带来全新解决方案！

近日，珀罗汀生物(PLD technology）利用自主无细胞表达系统，成功合成全长人源STEAP1膜蛋白，通过Gator® BLI技术高效完成与对应抗体的亲和力检测。实验结果显示，去垢剂(Detergent) 与纳米盘(Nanodisc)两种形式的STEAP1膜蛋白均表现出优异的抗原活性，纳米盘膜蛋白的BLI亲和力检测下限甚至达到0.078 nM!

实验设计

本次实验所用STEAP1膜蛋白为珀罗汀生物全长跨膜蛋白产品：Human STEAP1 Full-Length Protein（Detergent），PLDP0057-1；Human STEAP1 Full-Length Protein（Nanodisc），PLDP0057-2。所用抗体为商业化小鼠单克隆STEAP1抗体，购自圣克鲁斯生物（Santa Cruz Biotechnology），名称与目录号：STEAP抗体(B-4)，sc-271872；纯度95%。BLI亲和力检测由小鳄生物 Gator Bio 检测并提供实验结果。

去垢剂形式的STEAP1膜蛋白示意图（左）与SDS-PAGE图（右）

纳米盘形式的STEAP1膜蛋白示意图（左）与SDS-PAGE图（右）

实验结果亮点一览

1. 去垢剂形式STEAP1膜蛋白：背景干净、结合稳定

首先仪器探针利用Strep标签固化去垢剂体系中的STEAP1膜蛋白（10 μg/mL），随后结合STEAP1抗体（50 nM）；另外设置三组阴性对照。结果表明，去垢剂形式的STEAP1膜蛋白与探针结合牢固，且与抗体特异性结合显著。空白对照组结果显示，在去垢剂体系中，抗体与探针无非特异结合，背景干净。

2. 纳米盘体系STEAP1膜蛋白：亲和力强

同样先用探针固化纳米盘体系中的STEAP1膜蛋白（10 μg/mL），随后结合STEAP1抗体（50 nM）；实验缓冲液中添加0.05% Tween 20。结果显示，纳米盘体系中的STEAP1膜蛋白与探针结合良好，且与抗体的特异性结合信号清晰。空白对照组结果显示，在实验缓冲液添加0.05% Tween 20的实验条件下，抗体与探针无非特异结合。

3. 超高亲和力，数据超越预期

通过控制两种形式的STEAP1膜蛋白在探针上的固化量一致（固化高度均为1.6 nm），分别结合不同浓度抗体（100 nM，2倍梯度稀释），分别测定去垢剂和纳米盘体系中，STEAP1膜蛋白与抗体的亲和力。其中，纳米盘体系在是盐缓冲液中添加0.05% Tween 20；另外，在相同条件检测纳米盘组分中的“膜支架蛋白”与抗体的非特异结合情况。

结果显示，去垢剂形式的STEAP1膜蛋白与其抗体的亲和力约 0.619 nM；而纳米盘形式的STEAP1膜蛋白与其抗体的亲和力达到惊人的0.0782 nM，且膜支架蛋白与抗体无非特异结合！