无细胞蛋白表达:让膜蛋白表达不再困难
2024-07-19
膜蛋白作为复杂性功能蛋白,在物质运输、信号传导、能量转换及细胞增殖分化中发挥着重要作用,基于上述膜蛋白在细胞中的各种功能,膜蛋白一直是各研究方向的热点。
目前,在药物研发中,一半以上的药物靶点都是膜蛋白。但是由于膜蛋白结构特点,在研究中的重组表达上一直是一个难点,而具体多种原因包括以下几点:
膜蛋白定位:膜蛋白功能的正确行使,和其正确定位有着必要的关系,但是要保证膜蛋白的天然构象及正确的靶向和插入细胞膜是具有很大的难度;
跨膜蛋白疏水性:因为跨膜蛋白具有疏水区域,是它们能够稳定的嵌入细胞膜中,所以水环境中的蛋白表达出现错误折叠或聚集沉淀的问题;
蛋白质毒性:在跨膜蛋白大量表达时,因疏水区域问题,可能会出现大量错误折叠或未折叠的蛋白,而这些蛋白在内质网的积累会激活细胞应急反应,导致细胞死亡;
天然表达水平低:某些膜蛋白在天然表达水平上非常低,所以后续的纯化和检测难度较大,重复困难,增加时间成本。
案例一
案例二
无细胞蛋白表达技术可以很好的解决上述中膜蛋白表达的问题,此技术是在体外实现DNA到蛋白质的转录翻译过程,反应体系中包括转录翻译所必需的元件、物质和能量,并且我们会根据不同蛋白质特点构建不同的体外反应体系,确保目的蛋白的正确表达与折叠。如上图所示,在我们的预实验中,四次跨膜蛋白及七次跨膜蛋白使用无细胞蛋白表达体系表达,加入特殊配置的辅助分子试剂后,在上清液中得到了可溶性的目的蛋白,且产量水平清晰可见。
所以,我们相信无细胞蛋白表达技术能够助您在蛋白表达研究中更高效快捷。