CFPS攻无不克 膜蛋白难题迎刃而解
2025-01-06
膜蛋白在细胞的物质运输、信号转导、增殖分化等许多生命活动中起着非常重要的作用，是重要的药物靶点。然而，由于表达量低、构象不稳定、难分离纯化等原因，许多研究受限于膜蛋白难表达而止步不前。
山东农业大学某课题组就遇到这样一个难题：某膜蛋白用原核体系难以表达，经过两年时间反复尝试，仍未攻克难关。
珀罗汀生物基于自主研发的无细胞蛋白表达(CFPS)系统，已成功表达多例全长跨膜蛋白。该课题组慕名而来，在进一步了解CFPS技术以及珀罗汀生物在无细胞领域的技术优势之后，决定委托珀罗汀生物，利用CFPS平台尝试表达该膜蛋白。
测试方法
收到客户质粒后，珀罗汀生物研发人员立即着手构建线性表达模板，为了直接观测目标膜蛋白的表达情况并提高其可溶性，研发人员还构建了融合GFP的表达模板。随后，采用专研的针对膜蛋白的CFPS体系(即PLDK002试剂盒来源体系)，并添加去垢剂【1】，于收到质粒当天完成无细胞反应体系构建。
实验设计：
|
组别 |
NC |
A1 |
A2 |
B1 |
B2 |
|
是否融合GFP |
- |
- |
- |
+ |
+ |
|
是否添加去垢剂 |
- |
- |
+ |
- |
+ |
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纯化标签 |
- |
His标签 |
|||
注：【1】该去垢剂是依据珀罗汀生物膜蛋白表达案例库的实验数据选出。
测试结果
图1融合GFP的目标膜蛋白在照胶仪下发出绿色荧光
次日，取反应后上清，进行亲和纯化、表达鉴定。如图1所示，B1、B2两组在照胶仪下均发出绿色荧光，提示融合GFP的目标膜蛋白无论是否添加去垢剂，均可在CFPS体系的上清液中可溶表达!
图2 目标膜蛋白SDS-PAGE结果图
经考染、脱色后，如图2所示，未融合GFP的目标膜蛋白(A1、A2组)同样在上清液中可溶表达!此外，分别对比A1、A2组与B1、B2组可以发现，添加去垢剂可促进该膜蛋白的可溶表达。
总结
珀罗汀CFPS系统不负众望，两天之内，成功表达了困扰该课题组长达两年的膜蛋白，“难表达蛋白的救星”名副其实!本次实验的成功，再次显示出珀罗汀CFPS技术在膜蛋白等难度蛋白表达领域中的超群绝伦。
文末惊喜!
珀罗汀生物为了让CFPS技术惠及更多膜蛋白研究团队，同时满足新客户殷切期盼，现将“云上膜蛋白——蛋白表达定制服务，不表达不要钱”活动延长至2024年12月31日!
链接：云上膜蛋白——蛋白表达定制服务，不表达不要钱
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