1. 定点突变表达载体的制备
通过使用带有突变基因的引物对原始模板进行PCR的方式，将突变引入PCR产物当中。在用Dpn I 酶将模板质粒降解后，使用Seamless酶将线性模板重新连接为环状。涉及主要设备包括：移液工作站、PCR仪。
2. 高通量无细胞蛋白表达
取少量连接完的带有突变的环化模板，按照推荐的步骤，进行线性模板的PCR扩增。将扩增后的线性模板加入无细胞蛋白反应液后，进行无细胞反应。以上两步的移液操作均可由高通量移液工作站进行，后续加热步骤分别用到PCR仪和恒温摇床或恒温震荡混匀仪。
定点突变GFP的高通量筛选模型
我们在绿色荧光蛋白活性中心的5个位点分别进行氨基酸定点饱和突变。获得了全部突变体荧光性能，找到最优结构。
在十多小时内，完成近百种定点突变蛋白的构建、表达筛选
运用无细胞蛋白表达技术，全部构建、表达、筛选流程仅为7～13小时，其中累计人工操作时间仅30分钟。相比于传统方法，不仅极大地缩短了筛选周期，节约人力，而且大幅度增加了筛选蛋白的数量。
